En 2258, 10 ans après la guerre entre l'Alliance terrienne et la Fédération minbarie, Jeffrey Sinclair prend le commandement d'une station spatiale, appelée Babylon 5. Située dans un espace neutre, elle accueille les représentants des différentes races composant la communauté galactique au sein d'un Conseil regroupant cinq principales puissances et la Ligue des mondes non alignés qui sont décidés à maintenir la paix et la prospérité dans la galaxie.

Mais, la mission de Sinclair, puis celle de John Sheridan, s'avère particulièrement difficile à cause des conflits entre mondes (les Centauris contre les Narns), des dissensions internes (chez les Minbaris, et aussi sur Terre). Petit à petit, des indices semblent prouver l'existence d'une race aux desseins destructeurs, les Ombres.

• Michael O'Hare (VF : Gérard Rinaldi) : Commandant Jeffrey Sinclair (saison 1, trois épisodes des saisons 2 et 3)
• Bruce Boxleitner (VF : Hervé Bellon puis Bruno Carna) : Capitaine/Président John Sheridan (saisons 2 à 5)
• Claudia Christian (VF : Laurence Crouzet) : Lieutenant-Commandant/Commandant Susan Ivanova (saisons 1 à 4)
• Jerry Doyle (VF : George Caudron) : Chef de la sécurité Michael Garibaldi (saisons 1 à 5)
• Mira Furlan (VF : Véronique Augereau) : Ambassadeur Delenn (saisons 1 à 5)
• Richard Biggs (décédé en mai 2004) (VF : Bertrand Lieber) : Docteur Stephen Franklin (saisons 1 à 5)
• Bill Mumy (VF : Serge Faliu) : Lennier (saisons 1 à 5)
• Patricia Tallman (VF : Marie-Laure Beneston) : Lyta Alexander (pilote, saisons 2 à 5)
• Andreas Katsulas (décédé en 2006) (VF : Jean-Pierre Leroux) : Ambassadeur G'Kar (saisons 1 à 5)
• Peter Jurasik (VF : Gilbert Lévy) : Ambassadeur Londo Mollari
• Ardwight Chamberlain (VF : Pierre Hatet) : Ambassadeur Kosh Naranek (saisons 1 à 5)
• Stephen Furst (VF : Daniel Lafourcade) : Vir Cotto (saisons 1 à 5)
• Walter Koenig : Alfred Bester (saisons 1 à 5)
• Andrea Thompson : Talia Winters (saison 1)
• Jason Carter (VF : Bernard Bollet) : Ranger Marcus Cole (saisons 3 et 4)
• Tracy Scoggins (VF : Françoise Cadol) : Capitaine Elizabeth Lochley (saison 5)
• Julie Caitlin Brown : Na'Toth (saisons 1 et 5)
• Mary Kay Adams : Na'Toth (saison 2)
• Robert Rusler : Warren Keffer (saisons 1 et 2)
• Jeff Conaway : Zack Allan (saison 2 à 5)
• Wayne Alexander : Sebastian, Lorien, des rôles de Drazis et de Drakhs (saison 2 à 5)
• Tim Choate (mort en 2004) : Zathras (saisons 1 et 3)
• Robin Atkin Downes : Byron (saison 5)